Etiquetado incorrecto de suplementos dietéticos: estudio de caso sobre productos adelgazantes seleccionados mediante el desarrollo de un método HPLC isocrático verde para su control de calidad

Scientific Reports volumen 12, Número de artículo: 22305 (2022) Citar este artículo

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Una corrección del autor de este artículo se publicó el 31 de enero de 2023

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Hoy en día, una gran población consume suplementos dietéticos para adelgazar. Los productos a menudo se afirman como mezclas botánicas, pero no necesariamente son seguros. Las etiquetas engañosas también son muy comunes. Por lo tanto, los métodos analíticos validados para una amplia gama de compuestos adelgazantes son muy necesarios. En este documento, presentamos un método simple de HPLC/PDA para la cuantificación de siete ingredientes adelgazantes populares. Los compuestos estudiados fueron cafeína, cetona de frambuesa, trans-resveratrol, p-sinefrina, p-octopamina, p-hordenina y 2-fenetilamina. Después de la optimización, la separación se llevó a cabo en una columna C18 y la fase móvil fue una mezcla de acetonitrilo:agua que contenía ácido fosfórico al 0,1% (50:50, %v/v). El último compuesto se eluyó a los 9,76 min. La separación fue eficiente mostrando picos simétricos separados por la línea de base, sin usar ningún programa de gradiente, modificadores orgánicos de fase móvil o fases estacionarias modificadas. La validación del método se realizó siguiendo las directrices de la ICH. Las curvas de calibración fueron lineales en amplios rangos de concentración y los valores LOD calculados estuvieron en el rango de 0,02 a 0,09 µg/mL. El verdor del método se evaluó utilizando las herramientas métricas Analytical Eco-scale, GAPI y AGREE. Además, se analizaron cuatro productos de muestra aleatorios comprados en tiendas de suplementos en línea. Los resultados demostraron algunas acciones de etiquetado incorrecto. Para respaldar nuestros hallazgos, se llevó a cabo la adición estándar y el % de recuperación promedio fue de 96,67 a 101,44 % con una desviación estándar ≤ 2,83 entre las mediciones.

Los suplementos dietéticos para bajar de peso (DS) ahora son tendencia en Internet. Se consideran una forma fácil y segura de mantener la salud y lograr una buena apariencia física. Los consumidores creen falsamente que estos productos contienen ingredientes naturales y que su seguridad y eficacia han sido bien probadas antes de su lanzamiento al mercado. Desafortunadamente, estos productos sin receta son ineficaces y, en ocasiones, dañinos. Según la Ley de Educación y Salud de Suplementos Dietéticos (DSHEA) de 1994, los DS no están sujetos a aprobación previa a la comercialización con respecto a la pureza, el etiquetado, la seguridad y la eficacia. La FDA reacciona solo si se informan eventos adversos graves o nuevos hallazgos científicos después del lanzamiento al mercado. En consecuencia, el fraude de etiquetado incorrecto es muy común. Los ingredientes a menudo se enumeran como mezclas patentadas. Además, estas fórmulas de múltiples ingredientes contienen ingredientes prohibidos o no contienen los ingredientes activos reales enumerados en la etiqueta. El consumidor debe obtener un producto debidamente etiquetado y con una composición conocida. Por lo tanto, las normas oficiales adecuadas son obligatorias. El Instituto Nacional de Salud/Oficina de Suplementos Dietéticos (NIS/ODS) lleva a cabo algunas iniciativas regulatorias y fomenta el desarrollo de materiales de referencia estándar para los ingredientes de DS y métodos analíticos validados para allanar el camino hacia prácticas de control de calidad confiables1,2,3.

Según nuestra búsqueda en la web y en las tiendas naturistas locales, las fórmulas adelgazantes actualmente disponibles para el público contienen una amplia variedad de ingredientes, ya sea extraídos de sus fuentes naturales o de sus análogos sintéticos. Entre los compuestos más utilizados en estos productos OTC se encuentran el trans-resveratrol, la cetona de frambuesa y los compuestos de fenetilamina; 2-fenetilamina, p-sinefrina, p-octopamina y p-hordenina. También se notó que el alto contenido de cafeína es un aspecto importante en la mayoría de los DS para la pérdida de peso.

El resveratrol es un polifenol que se encuentra de forma natural en la piel de las uvas rojas para defenderse de condiciones de estrés como infecciones fúngicas o problemas ambientales. Ha sido ampliamente conocido por sus propiedades antioxidantes, antiinflamatorias y cardioprotectoras. También se utiliza como agente antiobesidad, siendo un antiadipocito que suprime los reguladores inductores de la adipogénesis. El resveratrol existe tanto en isómeros trans como cis. Sin embargo, la transformada es más estable estéricamente, abundante y biológicamente activa4. Según nuestra revisión de la literatura, el trans-resveratrol se analizó en productos complementarios utilizando varias técnicas, incluida la cromatografía líquida de alto rendimiento de fase inversa con detección de fluorescencia y UV5,6,7,8, cromatografía en columna de núcleo fusionado con detección de UV9, cromatografía en capa fina de alto rendimiento10, electroforesis capilar con detección UV11 y detección electroquímica12, espectrofluorimetría sincrónica de longitud de onda constante7 y onda cuadrada13,14 y voltamperometría de pulso diferencial15,16.

La cetona de frambuesa es el principal compuesto aromático que da el sabor característico de las frutas de frambuesa. Entre sus amplios beneficios para la salud, es un popular agente contra la obesidad. Induce la lipólisis e inhibe la absorción intestinal de grasas17. La cetona de frambuesa natural ostentaba el estado GRAS (generalmente reconocido como seguro) desde 196518. Aunque es un ingrediente abundante en el SD para perder peso, los efectos adversos de su consumo prolongado aún no están completamente caracterizados. Pocos estudios informaron hemólisis intravascular, hiperglucemia y mortalidad relacionada con la dosis en ratones19,20. Se han publicado varios métodos para el ensayo de cetona de frambuesa en productos DS, incluidos métodos de cromatografía líquida de alta resolución con detección de matriz de diodos usando columnas de fenilo21 y detección UV22. También se determinó mediante métodos cromatográficos en capa fina de alta resolución22, espectroscópicos IR23 y espectrofluorimétricos24,25,26.

Las fenetilaminas (PEA) son simpaticomiméticos que se encuentran como agentes supresores del apetito, termogénicos y lipolíticos en fórmulas para bajar de peso. La 2-fenetilamina es el ingrediente más abundante, seguido de Citrus aurantium; p-Sinefrina, p-Octopamina y p-Hordenina. A pesar de ser natural, la alta cantidad de PEAs en DS es posiblemente de origen sintético. Son estructuralmente similares a la epinefrina y la norepinefrina y afectan el sistema de neurotransmisores naturales del cuerpo. Por lo tanto, su seguridad sigue siendo cuestionada. Estos estimulantes adrenérgicos ejercen efectos adversos cardiovasculares serios que se exageran con la cafeína, especialmente que los obesos ya están en alto riesgo. La Agencia Mundial Antidopaje (AMA) enumeró la 2-fenetilamina y la p-octopamina como sustancias prohibidas e incluyó la p-sinefrina, la p-hordenina y la cafeína en la lista de seguimiento de 2021 para monitorear el patrón de su abuso entre los atletas. Sin embargo, todavía se ven al público2,27. Hasta donde sabemos, se han publicado métodos analíticos para la detección cualitativa o la cuantificación de PEA. Estos incluyen cromatografía en columna monolítica con quimioluminiscencia de permanganato de potasio ácido28, cromatografía líquida de alta resolución de fase reversa con detección UV29,30,31,32,33,34,35,36,37, detección de fluorescencia29,32,38 y detección de masas33,35,39 ,40,41, cromatografía de gases con detección de masas42, electroforesis capilar43, voltametría de onda cuadrada y diferencial de pulsos44,45 y espectroscopia de RMN46.

Hasta la fecha, no hay ningún método general disponible en la literatura para el ensayo simultáneo de los ingredientes para la pérdida de peso mencionados anteriormente. Solo se han publicado varios métodos para la separación de mezclas de p-Sinefrina, p-Octopamina y p-Hordenina32,38,40 y en ocasiones con Cafeína31,36. El etiquetado adecuado de los productos requiere métodos analíticos fiables y validados, y un método universal sigue siendo indispensable.

En este documento, nuestro objetivo fue proponer un método versátil que podría aplicarse de manera factible para las prácticas de control de calidad en los laboratorios reguladores. Desarrollamos un método de cromatografía líquida de alto rendimiento de fase reversa validado para la determinación simultánea de cafeína, trans-resveratrol, cetona de frambuesa, p-octopamina, p-sinefrina, p-hordenina y 2-fenetilamina, empleando un detector de matriz de fotodiodos. La separación se logró isocráticamente usando solo acetonitrilo y agua acidificada en un corto tiempo de ejecución. La validación formal se realizó de acuerdo con las pautas de ICH y el método se aplicó al análisis de muestras aleatorias de DS compradas en tiendas de salud en línea.

Cafeína anhidra (1, 3, 7-trimetilpurina-2, 6-diona, n.º CAS [58-08-2], certificado como ≥ 99,5 %), 2-feniletilamina HCl (n.º CAS [156-28-5 ], certificado como ≥ 98,0 %), p-hordenina HCl (4-(2-(dimetilamino) etil) clorhidrato de fenol, n.º CAS [6027-23-2], certificado como ≥ 99,5 %), p-octopamina HCl (clorhidrato de 4-(2-amino-1-hidroxietil) fenol, n.º CAS [770-05-8], certificado como ≥ 99,5 %), p-Synephrine HCl (4-[1-Hydroxy-2-( metilamino) etil] clorhidrato de fenol, n.º CAS [5985-28-4], certificado como ≥ 99,5 %), trans-resveratrol (trans-3, 5, 4′-trihidroxiestilbeno, n.º CAS [501-36-0 ], certificado como ≥ 99,0 %) y cetona de frambuesa (4-(4-hidroxifenil)-2-butanona, n.° CAS [5471-51-2], certificado como ≥ 99,5 %) se compraron en China (Baoji Guokang Biotecnología Co. Ltd); El acetonitrilo, el agua (Fisher Chemical, Reino Unido) y el ácido ortofosfórico al 85% (Merck, Darmstadt, Alemania) eran de grado reactivo para HPLC.

El análisis se llevó a cabo utilizando el módulo de separación HPLC Waters Alliance e2695 (Waters Co., MA, EE. UU.) equipado con un sistema de disolvente cuaternario, desgasificador de vacío en línea, circuito de inyección de 100 µl; inyector automático, compartimento de columna calentado y detector de matriz de fotodiodos (PDA). La columna analítica fue RP Spherisorb® ODS-2; 250 × 4,6 mm con tamaño de partícula de 5 µm (Waters Co., MA, EE. UU.). Se utilizó el software de datos de cromatografía Empower-3 para la recopilación y adquisición de datos. El compartimento de la columna y la bandeja de muestras se mantuvieron a 25 °C. La fase móvil fue una mezcla de Acetonitrilo: ácido fosfórico al 0,1 % en una relación 50:50 %v/v. Se inyectaron 20 µl de muestras por triplicado y se eluyeron isocráticamente con un caudal de 0,9 ml/min. El tiempo de ejecución total fue de 11 min y la columna se equilibró con la fase móvil durante 5 min entre inyecciones individuales. La detección de PDA se realizó a 205 nm para cafeína y 2-feniletilamina, 225 nm para cetona de frambuesa, p-octopamina, p-sinefrina y p-hordenina y 305 nm para trans-resveratrol. La eficacia de la separación se verificó mediante los resultados de idoneidad del sistema.

Se compraron cuatro muestras diferentes de suplementos dietéticos indicados para la pérdida de peso en tiendas de salud en línea. La muestra (1) se etiquetó para contener una mezcla patentada de 280 mg de cafeína anhidra, clorhidrato de sinefrina y clorhidrato de octopamina; por tableta. Se afirmó que la muestra (2) contenía 125 mg de 2-feniletilamina HCl, 80 mg de cafeína anhidra, 15 mg de hordenina HCl y 1 mg de sinefrina HCl; por tableta. Se afirmó que la muestra (3) era una mezcla de 400 mg de cetona de frambuesa (4 %), 400 mg de cafeína y extracto de uva equivalente a 200 mg; por porción de cápsulas. La muestra (4) se etiquetó para contener 300 mg de polvo de cetona de frambuesa, 200 mg de extracto de hoja de té verde, 100 mg de cafeína anhidra y una mezcla patentada de polvo de vinagre de sidra de manzana, polvo de pomelo, polvo de alga marina, polvo de fruta de acai, extracto de semilla de mango africano y extracto de Resveratrol al 10%; por porción de cápsulas. Todas las muestras fueron analizadas antes de su fecha de caducidad.

Se prepararon soluciones madre separadas (100 µg/mL) de todos los fármacos usando agua, excepto trans-Resveratrol, que se disolvió en acetonitrilo: agua (1:9, %v/v). Todas las soluciones madre fueron estables durante 7 días cuando se almacenaron a 4 °C. Las soluciones estándar de trabajo para la construcción de curvas de calibración se prepararon recientemente mediante una dilución alícuota lineal apropiada de las soluciones madre en la fase móvil.

El contenido de las cápsulas vacías o las tabletas en polvo fino equivalentes a una porción se pesaron con precisión, se disolvieron en agua (muestras 1 y 2) o en acetonitrilo: agua (1: 9, % v/v) (muestras 3 y 4), se sonicaron durante 10 min. Se prepararon soluciones filtradas y stock de cada muestra. Se prepararon diluciones apropiadas de cada muestra en fase móvil para estar dentro del rango de calibración y se analizaron bajo las condiciones de separación cromatográfica mencionadas anteriormente. La eficiencia de extracción se evaluó adicionalmente utilizando la técnica de adición estándar. Se agregaron cantidades conocidas de estándares puros a muestras comerciales; esas mezclas luego se sometieron a los pasos completos de preparación y cuantificación de la muestra. Las recuperaciones se calcularon restando la concentración de las muestras no enriquecidas de la concentración total de las muestras enriquecidas.

Dada la deficiente regulación de los DS, la existencia de métodos analíticos para identificar y cuantificar simultáneamente los diferentes constituyentes de estos productos es muy importante en el campo de la vigilancia sanitaria. Este estudio arroja luz sobre siete compuestos adelgazantes populares; a saber: cafeína, trans-resveratrol, cetona de frambuesa, p-octopamina, p-sinefrina, p-hordenina y 2-fenetilamina. Se desarrolló y validó un método RP-HPLC/PDA sencillo, ecológico y económico para su determinación simultánea. Hasta la fecha, se publican métodos analíticos para la cuantificación de un solo compuesto o una combinación de algunos de ellos. Además, estos métodos emplean programas de gradiente largo y proponen datos de validación mínimos5,22,30,33. Por lo tanto, esta propuesta se puede presentar como un método verde, simple y válido general para el control de calidad de una amplia variedad de productos DS disponibles comercialmente.

En nuestra investigación química de todos los compuestos mencionados, nuestro objetivo fue desarrollar un método ecológico que muestre la mejor resolución, forma de pico y sensibilidad utilizando una columna ODS convencional en un tiempo de ejecución muy corto. El cromatograma que muestra todos los compuestos separados se presenta en la Fig. 1. Se prefirió una columna C18 estándar, ya que es la más popular entre los laboratorios de control de calidad. Sin embargo, todos los analitos eran hidrofílicos básicos y la separación de los PEA básicos en sílice de fase inversa sin modificar fue un desafío. A pH neutro del agua, los analitos básicos se retienen fuertemente en los residuos de silanol y, por lo tanto, no aparecieron picos en los cromatogramas relevantes. A pH bajo, los silanoles unionizados y los analitos básicos ionizados limitan el intercambio de iones y permiten que los compuestos se eluyan47. Por lo tanto, los métodos en la literatura siempre utilizaron tampones ácidos o agentes de apareamiento de iones (p. ej., heptano sulfonato o lauril sulfato de sodio) a través de programas de gradiente de composición de fase móvil y/o gradiente de caudal en tiempos de ejecución prolongados31,48. Estos aditivos de fase móvil acortan la vida útil de la columna y los tediosos procedimientos de gradiente no son factibles para las prácticas de control de calidad. Solo se publicaron dos métodos en la literatura que presentan una concentración baja de ácido fosfórico en la fase móvil en lugar de usar modificadores de ácidos orgánicos. Se observó una resolución insuficiente entre los picos de octopamina y sinefrina a pesar de que ambos usaron composición de fase móvil en gradiente y/o elución en gradiente de velocidad de flujo36,37. El método propuesto se optimizó con respecto a la composición de la fase móvil, el caudal, la longitud de onda de detección y el volumen de inyección. Se probaron mezclas de metanol: ácido fosfórico al 0,1 % y acetonitrilo: ácido fosfórico al 0,1 % en diferentes proporciones y caudales. El acetonitrilo fue más prometedor que el metanol debido a su menor viscosidad y límite de UV. Los cromatogramas de metanol eran ruidosos y esto reducía la sensibilidad del método49. Se ensayó una mezcla de acetonitrilo:ácido fosfórico al 0,1% en las proporciones 30:70, 50:50 y 70:30, %v/v. En una proporción baja de acetonitrilo, los picos de octopamina y sinefrina se eluyeron conjuntamente. El aumento de la proporción de agua acidificada provocó un aumento relativo en la protonación de las bases y disminuyó su retención en la columna. En una proporción alta de acetonitrilo, el último compuesto se eluyó a los 30 min junto con la coelución de los picos de cafeína y trans-resveratrol. La mejor separación inicial de los siete compuestos se observó con elución isocrática de acetonitrilo: mezcla de ácido fosfórico al 0,1 % (50:50, % v/v). La elución isocrática fue suficiente para proporcionar una separación de línea de base satisfactoria con una resolución entre picos de más de 2, eliminando la necesidad de los laboriosos programas de gradiente publicados anteriormente y los modificadores orgánicos en la fase móvil. Se inyectaron muestras de disolvente en blanco y no se detectó ningún remanente entre las ejecuciones. Se probaron diferentes velocidades de flujo de la bomba, una velocidad de flujo de 0,9 ml/min mostró la mejor resolución entre picos junto con el menor tiempo de ejecución posible con el último compuesto eluido a los 9,76 min. Aunque la cetona de frambuesa y los guisantes mostraron espectros UV casi similares, se eluyeron de manera diferente de la columna en condiciones optimizadas. Cada analito se detectó en su λmax; 205 nm para cafeína y 2-fenetilamina, 225 nm para cetona de frambuesa, p-sinefrina, p-octopamina y p-hordenina y 305 nm para trans-resveratrol. El volumen de inyección óptimo fue de 20 µl, por encima del cual se distorsionaron las formas de los picos. Por lo tanto, tanto las longitudes de onda de detección como el volumen de inyección se atribuyen a la sensibilidad del método.

Cromatograma HPLC-PDA de solución estándar de los fármacos estudiados a 205 nm para cafeína y 2-fenetilamina, 225 nm para Raspberry Ketone, p-Octopamine, p-Synephrine, p-Hordenine y 305 nm para trans-Resveratrol (2 µg/mL cada).

Todos los parámetros de validación para nuestro método propuesto se calcularon según las pautas ICH Q2 (R1)50.

Bajo las condiciones cromatográficas propuestas, todos los analitos objetivo se separaron hasta la línea base, mostrando picos bien resueltos tanto para las soluciones estándar puras como para las muestras de suplemento analizadas. Los cromatogramas representativos (Figs. 1 y 2) no muestran picos que interfieran en los tiempos de retención de los fármacos estudiados.

Cromatograma HPLC-PDA de muestras de suplementos dietéticos (a muestra 1, b muestra 2, c muestra 3 y d muestra 4).

Se construyeron curvas de calibración de cinco a siete puntos para los fármacos estudiados, correlacionando el área máxima promedio en la longitud de onda de detección seleccionada con la concentración correspondiente y se calcularon las ecuaciones de regresión. Todos los rangos de linealidad y los parámetros de regresión se enumeran en la Tabla 1. Todos los fármacos fueron lineales en rangos de concentración aceptablemente amplios con valores de coeficiente de correlación superiores a 0,999.

La sensibilidad del método se analizó en términos de valores LOD y LOQ. La determinación de LOD y LOQ se basó en datos de calibración utilizando la desviación estándar residual de la línea de regresión en el rango del límite de detección (σ) y la pendiente de la curva de calibración (s), aplicando la fórmula LOD = 3,3 × σ/s y LOQ = 10 × σ/s. Los resultados se presentan en la Tabla 1.

La precisión se evaluó analizando diferentes concentraciones de soluciones de fármaco puro en los rangos lineales. Los resultados de precisión se expresaron como recuperaciones porcentuales promedio. La desviación estándar relativa porcentual (%RSD) se calculó entre un conjunto de mediciones por triplicado de tres concentraciones diferentes de cada fármaco realizadas el mismo día y en tres días consecutivos para expresar la precisión intradía e interdía; respectivamente. Los resultados calculados, expresados ​​en la Tabla 1, demuestran que nuestro método es exacto y preciso, como lo indican los porcentajes de recuperación cercanos al 100 % y los valores de % RSD inferiores al 2 %.

System suitability testing evaluates the whole components of an analytical system and efficiency of separation. During method optimization, System suitability parameters were calculated using Empower® software as described in FDA guidance for industry on Validation of Chromatographic Methods and USP-NF General Chapter <621> Chromatography–system suitability Chromatography. 258–265 (2012)." href="/articles/s41598-022-24830-1#ref-CR51" id="ref-link-section-d39835053e1464"> 51. Bajo las condiciones seleccionadas, los resultados (Tabla 2) estuvieron dentro de los valores aceptables verificando que el sistema cromatográfico es eficiente mostrando picos simétricos bien resueltos. Por lo tanto, el método propuesto es adecuadamente válido para su propósito previsto.

La prueba de robustez es una medida del grado de confiabilidad del método ante una variación pequeña pero deliberada en las condiciones de operación. También destaca y establece límites para los parámetros críticos del método. Se analizaron varias muestras al mismo nivel de concentración después de variar el caudal de la bomba (± 0,05 ml/min) y la composición de la fase móvil (± 2 %) y se calculó el % RSD del ensayo en cada variación típica. Los resultados (Tabla 3) revelan que el método fue sólido con respecto a los cambios de caudal. Sin embargo, la composición de la fase móvil es un parámetro de método crítico que afecta la resolución entre picos. El aumento de la concentración de ácido fosfórico al 0,1 % en la fase móvil en un 2 % no afectó al % del ensayo del fármaco, pero la resolución disminuyó a 1,74 y 1,81 para los picos de cetona de frambuesa-octopamina y octopamina-sinefrina; respectivamente.

Tras la validación, se avaló la viabilidad del método propuesto. Se compraron cuatro muestras diferentes de DS de minoristas en línea y se analizaron utilizando nuestros procedimientos mencionados. La extracción se realizó simplemente con agua, excepto para las muestras que afirmaban contener Resveratrol, que se utilizó acetonitrilo al 10% en agua. Los compuestos se identificaron sobre la base de tiempos de retención relevantes, espectros UV y muestras de adición con cantidades conocidas de estándares puros para compuestos espectralmente similares. Los cromatogramas representativos (Fig. 3) no mostraron picos que interfirieran en las regiones relevantes. Además, la prueba de pureza máxima se realizó con el software Empower® PDA para excluir posibles impurezas o productos degradados coeluidos con los compuestos estudiados. La evaluación implicó comparar un ángulo de pureza con el ángulo de umbral para cada pico. El ángulo de pureza, el grado de homogeneidad espectral, compara los espectros en cada punto del pico con el espectro en el vértice del pico. El ángulo de umbral es el ángulo de pureza más grande posible atribuido a la coelución, el ruido, el disolvente y el error del detector. Una impureza se detecta dentro de un pico cuando su ángulo de pureza excede su ángulo de umbral. En todos los productos de DS probados, los picos correspondientes a los fármacos estudiados mostraron un ángulo de pureza inferior al ángulo de umbral (Tabla 4), lo que demuestra homogeneidad espectral y, por lo tanto, confirma la pureza de los picos de elución52.

(a) GAPI: índice de procedimientos analíticos verdes (b) ACUERDO: evaluaciones de la Calculadora de VERDE analítica de nuestros métodos propuestos.

Los contenidos de las muestras se midieron y compararon de acuerdo con las afirmaciones de la etiqueta. Luego, las muestras se enriquecieron con cantidades conocidas de estándares puros para identificar mejor los compuestos y evaluar la eficiencia de extracción. Los resultados del ensayo y de la adición del estándar se presentan en la Tabla 4.

Para las muestras (1) y (2), las cantidades medidas coincidían bastante con las de la etiqueta. La muestra (1) contenía una ingesta total de p-Sinefrina y p-Octopamina superior a los niveles seguros, además de la elevada cantidad de Cafeína2,53. Esto probablemente explica la intención del fabricante de engañar al consumidor sobre el contenido de agente activo, que la mezcla estaba etiquetada como una mezcla patentada sin indicar la cantidad exacta de cada componente. A pesar de que los resultados del análisis de la muestra (2) coincidieron con la afirmación de la etiqueta, es crucial alertar que contiene un nivel muy alto de 2-fenetilamina sintética prohibida y, sin embargo, todavía está disponible para la venta al público. Para las otras muestras analizadas, los resultados mostraron que los contenidos reales diferían en gran medida de las declaraciones de la etiqueta. No se detectó resveratrol por encima del LOD del método en la muestra (3), aunque la etiqueta indicaba que contenía 100 mg de extracto de uva. Además, contenía casi la mitad de su contenido de cetona de frambuesa etiquetado. Del mismo modo, la Muestra (4) contenía aproximadamente un 3% de la cetona de frambuesa etiquetada, aunque se declaró como el principal agente activo del producto. Para respaldar la precisión de nuestros hallazgos, se aplicó la adición estándar a las muestras defectuosas y las recuperaciones promedio variaron entre 96,67 y 103,33 %.

El verdor del método se evaluó utilizando la herramienta ''Eco-Scale''. En la evaluación considera peligrosidad y cantidad de reactivos utilizados, consumo de energía, riesgo laboral y generación de residuos. Cada elemento recibe una cantidad de puntos de penalización (PP) y los PP totales se restan de una puntuación total ideal de 100. Las puntuaciones de escala ecológica >75, >50 o <50 describen un verdor excelente, aceptable o inadecuado; respectivamente. La puntuación de escala ecológica, calculada según lo descrito por Namiesnik et al.54, fue de 90, lo que demuestra que nuestro método es excelente para la ecología (Tabla 5).

GAPI es una herramienta semicuantitativa que evalúa todas las etapas de un procedimiento analítico desde la recolección de muestras hasta la preparación y el análisis final. También muestra si un método es cualitativo o cuantitativo. La evaluación implica un símbolo de tres colores que consta de cinco pentagramas. Cada sección está coloreada de verde, amarillo o rojo para una compatibilidad ambiental alta, media y baja; respectivamente. Esta métrica resalta visualmente las variaciones entre diferentes metodologías analíticas55,56. La evaluación GAPI de nuestro método analítico propuesto se calculó utilizando el software ComplexGAPI®57 y los resultados se muestran en la Fig. 3a.

AGREE es una métrica automatizada que considera los 12 principios de la Química Analítica Verde (IMPORTANCIA) durante la evaluación. Cada criterio recibe una puntuación de 0 a 1. El resultado final es un pictograma dividido en 12 segmentos. Cada segmento es de color verde, amarillo o rojo en diferentes intensidades de color, según su verdor. El ancho de cada segmento corresponde a su peso asignado por el usuario. Finalmente, en el centro del pictograma se presenta una puntuación total de toda la metodología analítica con un color correspondiente a esta puntuación, donde el verde oscuro se asocia a valores cercanos a 1. Este método se considera único por su flexibilidad y que no solo considera los peligros de un método analítico pero también su resultado58. La evaluación AGREE de nuestro método analítico propuesto se calculó utilizando el software AGREE® y los resultados se muestran en la Fig. 3b.

En este manuscrito, se evaluó el problema del etiquetado incorrecto de DS en el mercado. Para el ensayo de DS de pérdida de peso, se desarrolló un método RP-HPLC isocrático con detección de matriz de diodos para la separación y cuantificación de siete agentes lipolíticos populares en DS de pérdida de peso. El método propuesto es amigable con el medio ambiente en el que solo se inscriben acetonitrilo y agua acidificada para una separación completa en un tiempo de ejecución adecuadamente corto. La separación fue eficiente y mostró picos de forma gaussiana bien resueltos. La validación se realizó de acuerdo con las pautas de ICH y los resultados demostraron que el método es sensible, exacto, preciso y robusto en un amplio rango de concentración. Además, se aplicó al ensayo de cuatro productos DS comprados aleatoriamente en tiendas en línea. Nuestros resultados revelaron la discrepancia entre el contenido etiquetado y el real en dos de las muestras analizadas. Las otras dos muestras coincidieron con las afirmaciones de la etiqueta. Sin embargo, vale la pena alertar que estas dos muestras contenían niveles de cafeína y PEA más altos que los seguros que ya están en la lista de monitoreo/prohibición de la AMA y, sin embargo, todavía están disponibles para el público. Finalmente, creemos que este procedimiento simple, verde, eficiente y rentable contribuirá a mejorar las prácticas regulatorias de DS.

Los conjuntos de datos generados y analizados durante el estudio actual están disponibles del autor correspondiente a pedido razonable.

Se ha publicado una corrección de este artículo: https://doi.org/10.1038/s41598-023-28976-4

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Departamento de Química Analítica Farmacéutica, Facultad de Farmacia, Universidad Ain Shams, El Cairo, 11566, Egipto

Noha F. El Azab, Sarah H. Abdelaal y Amira M. El-Kosasy

Departamento de Química Analítica, Facultad de Farmacia, Universidad de El Cairo, Calle Kasr El-Aini, El Cairo, 11562, Egipto

Dijo A. Hassan

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NFE-A.: Conceptualización, Recursos, Análisis formal, Redacción-revisión y edición. SHA: Conceptualización, Metodología, Investigación, Análisis formal, Redacción del borrador original. SAH: Conceptualización, Investigación, Validación, Redacción—revisión y edición. AME-K.: Conceptualización, Supervisión, Administración de Proyectos.

Correspondencia a Sarah H. Abdelaal.

Los autores declaran no tener conflictos de intereses.

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Se revisó la versión original en línea de este artículo: La versión original de este artículo contenía un error en la ortografía del autor Noha F. El Azab, que se proporcionó incorrectamente como Noha F. El-Azab.

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Reimpresiones y permisos

El Azab, NF, Abdelaal, SH, Hassan, SA et al. Etiquetado incorrecto de suplementos dietéticos: estudio de caso sobre productos adelgazantes seleccionados mediante el desarrollo de un método HPLC isocrático verde para su control de calidad. Informe científico 12, 22305 (2022). https://doi.org/10.1038/s41598-022-24830-1

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Recibido: 10 Septiembre 2022

Aceptado: 21 de noviembre de 2022

Publicado: 24 diciembre 2022

DOI: https://doi.org/10.1038/s41598-022-24830-1

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